1、 葡萄糖：用于细胞能量代谢。
2、CO₂：细胞需要少量的二氧化碳来维持生长。
在培养基中，溶解的CO₂与碳酸氢盐离子处于平衡状态，许多培养基利用了这种CO₂/碳酸氢盐反应来缓冲培养基的pH值。CO₂溶解在培养基中，与水反应生成碳酸。随着细胞代谢产生更多的CO₂，随着下面的化学反应向右驱动，介质的pH值下降，通过向培养基中添加碳酸氢钠，可使pH值维持在7.2 ~ 7.4的最佳范围。
3、酚红：用于监测培养基的pH值。
在细胞生长过程中，由于细胞释放的代谢物改变了pH值，培养基的颜色也随之改变。在较低的pH值下，酚红会变成中黄色，而在较高的pH值下，它会变成中紫色。对于大多数培养体系(pH为7.2 ~ 7.4)，培养基应为鲜红色。（部分特殊培养基不添加酚红，例如对雌激素敏感的乳腺组织细胞，酚红会发挥跟类固醇相似的功能从而影响细胞。）
4、L-谷氨酰胺：
几乎是所有哺乳动物和昆虫细胞所必需的氨基酸，用于合成蛋白质，参与核酸代谢。它相比其他氨基酸更不稳定，容易降解，降解的速率和程度与储存温度、时间和pH值有关。
5、非必需氨基酸NEAA：
所有的培养基配方都含有10种必需氨基酸以及半胱氨酸、谷氨酰胺和酪氨酸。在一些培养基中还需要加入其他非必需氨基酸(丙氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、脯氨酸和丝氨酸)可以减少细胞的代谢负担，从而增加细胞增殖。
6、 丙酮酸钠：
丙酮酸是糖酵解过程中的中间有机酸代谢物，可以轻易地进出细胞，可以为合成代谢过程提供能量来源和碳骨架。大多数培养基中丙酮酸钠的最终浓度为1mM，但在L-15培养基中增加到5mM，方便在无CO2环境中使用。
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