各种细菌所具有的酶系统不尽相同,对营养基质的分解能力也不一样,因而代谢产物或多或少地各有区别,可供鉴别细菌之用.用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物,从而鉴别细菌的种属,称之为细菌的生化反应。
(1)、糖(醇)类发酵试验
不同的细菌含有发酵不同糖(醇)的酶,因而发酵糖(醇)的能力各不相同.其产生的代谢产物亦不相同,如有的产酸产气,有的产酸不产气.酸的产生可利用指示剂来判定.在配制培养基时预先加入溟甲酚紫［P HS. 2(黄色)一6 . 8 (紫色)],当发酵产酸时,可使培养基由紫色变为黄色.气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明.例如：甘露醇发酵试验。
(2)、甲基红(Methylred)试验(该试验简称MR试验)
很多细菌,如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸再被分解,产生甲酸、乙酸、乳酸等,使培养基的pH 降低到4 . 2 以下,这时若加甲基红指示剂呈现红色.因甲基红指示剂变色范围是pH4 . 4 (红色)一pH6 . 2 (黄色).若某些细菌如产气杆菌,分解葡萄糖产生丙酮酸,但很快将丙酮酸脱梭,转化成醇等物,则培养基的pH 仍在6 . 2 以上,故此时加入甲基红指示剂,呈现黄色。
(3)、靛基质(吲哚)试验
某些细菌,如大肠杆菌,能分解蛋白质中的色氨酸,产生靛基质(吲哚),靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合,形成玫瑰色靛基质(红色化合物)。
(4）氨基酸脱羧酶试验
具有氨基酸脱羧酶的细菌，能分解氨基酸使其脱羧生成胺（赖氨酸→尸胺，鸟氨酸→腐胺，精氨酸→精胺）和二氧化碳，使培养基变碱。使指示剂显示出来。结果：对照管应呈黄色，试验管呈蓝绿色（指示剂为溴麝香草酚蓝）为阳性，若试验管呈黄色为阴性。若对照管呈现蓝-绿色则试验无意义，不能作出判断。这主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。例如：赖氨酸脱羧酶利用试验。
（5）淀粉水解试验
细菌对大分子的淀粉不能直接利用,须靠产生的胞外酶(淀粉酶)将淀粉水解为小分子糊精或进一步水解为葡萄糖(或麦芽糖),再被细菌吸收利用,细菌水解淀粉的过程可通过底物的变化来证明,即用碘测定不再产生蓝色。
（6）硫化氢试验
某些细菌能分解含硫的氨基酸(肌氨酸、半肌氨酸等),产生硫化氢,硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐,形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁.为硫化氢试验阳性,可借以鉴别细菌。
(7)、柠檬酸盐利用试验
柠檬酸盐培养基系一综合性培养基,其中柠檬酸钠为碳的唯一来源.而磷酸二氢按是氮的唯一来源.有的细菌如产气杆菌,能利用柠檬酸钠为碳源,因此能在柠檬酸盐培养基上生长,并分解柠檬酸盐后产生碳酸盐,使培养基变为碱性.此时培养基中的溟廖香草酚蓝指示剂由绿色变为深蓝色.不能利用柠檬酸盐为碳源的细菌,在该培养基上不生长,培养基不变色。
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