碧云天生产的PNGase F去糖基化试剂盒(PNGase F Deglycosylation Kit)，又称PNGase F聚糖切割试剂盒(PNGase F Glycan Cleavage Kit)或PNGase F释放试剂盒(PNGase F Releasing Kit)，是一种去糖基化试剂盒，可在天然或变性条件下从糖蛋白或糖多肽中切割N-糖苷键，从而去除N-聚糖链。

PNGase F，即Peptide N-Glycosidase F，中文名称为N-糖酰胺水解酶F，简称糖基肽酶F，是一种通过E.coli重组表达来源于Elizabethkingia miricola(formerly Flavobacterium meningosepticum)的糖基肽酶。糖基肽酶F可以在几乎所有类型的N-多糖如高甘露糖(High mannose)、混合型和复杂寡聚糖(Hybrid and complex oligosaccharides)的最内端N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc, N-acetylglucosamine)和天冬酰胺(Asn)残基的连接处切割，从而移除N-寡聚糖(N-linked oligosaccharides)，将蛋白和糖链修饰分开(图1) [1]，可用于抗体、免疫球蛋白融合蛋白或其它糖蛋白的体外去除N-糖基化修饰反应。另外Concanavalin A磁珠分离细胞或膜蛋白后，可使用PNGase F酶进行糖基的切除，从而使糖蛋白从Concanavalin A磁珠上解离下来，对于后续膜蛋白的质谱分析有很大帮助[2]。本糖基肽酶F的N端带有His-tag，可以通过相应的His抗体琼脂糖凝胶、磁珠或镍柱吸附去除。

图1. 碧云天PNGase F去糖基化试剂盒(P2318)移除N-糖苷(N-linked oligosaccharides)的示意图。糖链可以在图中戊糖(pentasaccharide)的R1、R2和R3位置延伸。R1位置只能是空缺或α-6 fucose，不能是α-3 fucose，否则就不能被PNGase F切割。R2和R3位置可以是任意的单糖或多糖。

糖基化修饰(Glycosylation)是一种蛋白质翻译后修饰(Post-translational modification, PTM)，几乎存在于所有生物体中，包括真核生物、真细菌(Eubacteria)和古细菌(Archaea)。糖基化修饰的多样性会改变蛋白的质量和电荷，在蛋白质分类、免疫识别、受体结合、炎症、致病性和许多其他过程中发挥着关键的生物功能[3-5]。最新的研究表明，核酸也存在糖基化修饰。

本试剂盒中PNGase F的基本信息如下表：

PNGase F最佳酶切温度为37℃，在较宽的pH范围(6.0-10.0)，在较宽的温度范围(4-50℃)，较宽的离子强度范围(0-1M NaCl)内均具有较高的酶活性。本产品与国外同类产品Competitor N相比，去除蛋白糖基的效果基本一致(图2)。

图2.碧云天的PNGase F去糖基化试剂盒(P2318)去除蛋白糖基化修饰的效果图。在20μl反应体系中，加入10μg N-糖基化修饰蛋白及相应量的本产品或国外同类产品Competitor N，37ºC孵育1小时后，加入4μl SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(6X) (P0289)，混匀后95ºC加热5分钟，使用BeyoGel™ Plus PAGE预制胶(Tris-Gly, 4-20%, 10孔) (P0468)电泳，蛋白Marker为BeyoColor™彩色预染蛋白分子量标准(6.5-270kD) (P0071/P0072)，并经BeyoBlue™考马斯亮蓝超快染色液(P0017F)染色。图中可见经PNGase F处理后，糖基化蛋白的迁移率发生变化，蛋白条带大小从略大于66kDa转变为约52kDa。实际效果会因样品种类、检测条件等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。

PNGase F储存液: 10mM Tris (pH7.4), 50mM NaCl, 5mM EDTA。储存液不含甘油，便于HPLC方法优化色谱条件。

Reaction Buffer (10X): 500mM Sodium Phosphate (pH7.5)。

本试剂盒用于去除糖蛋白或糖肽的N-糖苷(N-linked oligosaccharides)的酶切反应时，如果按照每100μg糖蛋白使用1μl (500U/μl)在37℃反应1小时，本产品小、中、大包装分别可以用于2.5mg、5mg和25mg糖蛋白的N-糖苷移除，相当于25、100和500次反应。

包装清单：

保存条件：

-20℃保存，一年有效。

注意事项：

PNGase F不能水解含有core α1-3 Fucose的N-糖苷(常见于植物及昆虫糖蛋白，此时需要使用PNGase A)。

超纯水推荐选购ST876 BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。